测定意义
肌酐(Creatinine,CRE)是肌肉代谢的产物,主要通过肾小球滤过排出体外。在正常情况下,体内肌酐的含量基本稳定。血液中的肌酐浓度可作为检测肾小球滤过功能的指标之一。
测定原理
肌酐酶特异作用于肌酐生成肌酸,肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的相继作用下生成过氧化氢,过氧化氢与显色剂反应呈现紫色,该有色物质在546nm有最大吸收峰,进而计算得到肌酐含量。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一:10mL×1瓶,-20℃避光保存;
试剂二:3.5mL×1瓶 ,-20℃避光保存;
标准品:粉剂x1瓶,4℃避光保存,用前甩几下使粉剂落入底部,再加1mL蒸馏水溶解即标准品浓度为2mg/mL,再用蒸馏水稀释40倍(1:39份水)成0.05mg/mL,即442μmol/L的肌酐标准品待测液;
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定