测定意义
多酚(Polyphenol, or Phenolic compounds),是一类在植物体内普遍存在的多元酚结构的次生代谢物,广泛存在于药用植物、蔬菜和水果中。植物多酚的主要类型包括简单的酚酸(如没食子酸和香草酸)、黄酮类(如黄酮、黄酮醇、儿茶素)、类二苯乙烯、木酚素和聚合多酚类物质(如原花青素和单宁酸)。这些化合物在植物抵御紫外线辐射中起着重要作用,对食草动物和微生物起到威慑或拮抗作用,在植物生长、成熟等过程中也起着信号分子的作用。大量研究表明,很多酚类化合物具有抗氧化、抗微生物、抗癌、抗炎等多种作用,可用于预防心血管疾病、癌症、糖尿病以及与氧化应激有关的疾病。多酚广泛存在于植物中,检测其含量有助于更好地利用植物资源,同时可以进一步探索其在医药、保健等领域的应用潜力。
测定原理
多酚分子中的酚羟基(-OH)在福林酚试剂的作用下被氧化生成蓝色化合物,产物在778nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可定量检测茶多酚的含量。没食子酸当量(Gallic acid equivalent, GAE)是一种用于量化样品中多酚含量的标准方法,即以没食子酸作为标准品,通过比较其含量来计算其它多酚的含量。
需自备的仪器和用品
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96孔板、50目筛、研钵、烘箱、蒸馏水、超声清洗机、台式离心机。
试剂清单
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试剂名称
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规格
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数目
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贮藏
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提取液
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液体60mL
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x1
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4℃
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试剂一
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液体20mL
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x1
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4℃,避光
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试剂二
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液体20mL
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X1
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4℃
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标准品
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粉剂
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x1
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4℃,避光
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预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定;