谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性试剂盒分光法/24样
测定意义
GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理
GSH-Px活性以催化GSH氧化的反应速度,及单位时间内GSH减少的量来表示,GSH和DTNB反应在GSH-Px催化下可生成黄色产物,于412nm下有最大吸收峰,反应液黄色越浅,GSH-Px活性越高,反应液黄色越深,GSH-Px活性越低。
自备实验用品及仪器
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、研钵、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂盒组分与配制
提取液:液体30 mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL蒸馏水溶解。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加入6mL蒸馏水。
标准品:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL蒸馏水溶解即为1µmol/mL GSH。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。