测定意义
肌酸激酶(CK)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生等有直接关系的重要激酶。
测定原理
肌酸激酶能够催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶(Hexokinase)催化ATP和葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340 nm有特征吸收峰,通过测定340 nm处吸光值变化即可表征肌酸激酶的活性。
需自备的仪器和用品
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96UV孔板、研钵、水浴锅和蒸馏水。
试剂的组成
提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体24mL×1瓶,4℃避光保存(可保存3个月);
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃避光保存(可保存3个月)。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定;