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辅酶1 NAD(H)含量 (WST-8法)检测试剂盒

测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样本中NAD+和NADH，在1-mPMS作用下，WST-8可与NADH 反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用WST-8检测。
需自备的仪器和用品
酶标仪、台式离心机、移液器、水浴锅、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、加样表(在96孔板中按下表依次加样）：

试剂名称（μL）

测定管

空白管

样本

20

-

蒸馏水

-

20

试剂一

160

160

试剂二

10

10

试剂三

10

10

 充分混匀，37℃孵育30min后于450nm处测定吸光值A , 计算△A=A测定管-A空白管。

注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。

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