产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 猪SST。
简介
生长抑素(SST),又称生长激素抑制激素 (GHIH),是一种调节内分泌系统的肽类激素。它通过与G蛋白偶联生长抑素受体相互作用和抑制许多次级激素的释放来影响神经传递和细胞增殖。它抑制胰岛素和胰高血糖素的分泌,它有两种活性形式,由单个前蛋白的替代切割产生:一种由14个氨基酸组成,另一种由28个氨基酸组成。它的释放受到迷走神经的抑制,它的作用扩散到身体的不同部位,在消化系统中,它由几个位置的δ细胞分泌,即幽门窦,十二指肠和胰岛,它与皮质抑素同源并抑制胃肠道激素的释放、降低胃排空率,减少平滑肌收缩和肠内血流量、抑制胰腺激素的释放、抑制胰腺的外分泌分泌作用;在大脑中,它由下丘脑腹内侧核的神经内分泌神经元产生。在垂体前部,生长抑素的作用是:抑制生长激素的释放、抑制促甲状腺激素的释放、抑制壁细胞中的腺苷酰环化酶、抑制催乳素的释放。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物SST,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中SST的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中SST浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.625 |
7.81 |
0 |
OD值 |
2.426 |
1.701 |
0.909 |
0.778 |
0.454 |
0.215 |
0.199 |
0.08 |
校正OD值 |
2.346 |
1.621 |
0.829 |
0.698 |
0.374 |
0.135 |
0.119 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 猪血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 猪血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度SST,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 猪ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。