产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人SAP。
简介
血清淀粉样蛋白P成分(SAP)是淀粉样蛋白P成分(AP)的相同血清形式,是一种25kDa的五聚体蛋白,首次被确认为体内病理沉积物的五边形成分,称为"淀粉样蛋白",SAP是五联素家族的一员,其特点是依赖钙的配体结合 和独特的扁平β-果冻结构,与豆类凝集素相似,"五联素"与五个单体形成一个直径约95埃、深35埃的环的径向对称性有关,SAP与C-反应蛋白(CRP)有51%的序列同源性,CRP是一种经典的急性期反应血浆蛋白,与PTX3(一 种细胞因子调节分子)等"长"五联素和几种神经元五联素有更远的亲缘关系,SAP和CRP在所有脊椎动物中都是进化保守的。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物SAP,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中SAP的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中SAP浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
100 |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.13 |
1.57 |
0 |
OD值 |
2.444 |
1.717 |
1.048 |
0.782 |
0.448 |
0.243 |
0.18 |
0.074 |
校正OD值 |
2.370 |
1.643 |
0.974 |
0.708 |
0.374 |
0.169 |
0.106 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度SAP,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。