蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸,使蛋白质在270~290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质,其中酪氨酸的最大吸收峰为275nm,色氨酸的最大吸收峰为280nm,苯丙氨酸的最大吸收峰为257nm。在上述波长范围内,蛋白质溶液的吸收值与其浓度呈正比,可作定量测定。
Leagene 紫外法蛋白定量试剂盒优点是:操作迅速、简便,不易受低浓度盐类的干扰;缺点是与标准蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差异较大的蛋白质,准确性较差。样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸会干扰检测结果。
自备材料:
1、 分光光度计或酶标仪
2、 96孔板或离心管
操作步骤(仅供参考):
1、 用去离子水或蒸馏水稀释蛋白稀释液(10×)至1×,即为蛋白稀释工作液。取1支20mg的蛋白标准,加入20ml蛋白稀释工作液,即配制成蛋白标准(1mg/ml),-20℃保存。
2、 标准曲线法:取若干试管或96孔板,如下操作以分光光度法为例。选用1cm的石英比色皿,在280nm处以第1管作为调零点,分别检测各管吸光度,以A280为纵坐标,以蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
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