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植物elisa试剂盒检测样本的处理方法
时间: 2021-11-08 08:59:13

植物elisa试剂盒检测 样本的处理方法

植物elisa试剂盒检测应用双抗体夹心法测定标本中植物淀粉分支酶SBE水平。用纯化的植物淀粉分支酶SBE抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物淀粉分支酶SBE,再与HRP 标记的植物淀粉分支酶SBE抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物淀粉分支酶SBE呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物淀粉分支酶SBE浓度。


植物elisa试剂盒检测的操作步骤:

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃;

2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加;

4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min;

5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次;

6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min;

7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


植物elisa试剂盒检测的样本处理:

1、血清:使用不含热原和内dusu的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3、细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5、保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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